一、背景

人肠微血管内皮细胞是采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，该细胞可通过vWF/Factor VIII和CD31(PECAM)特异性抗体的免疫荧光鉴定以及DiI-Ac-LDL的摄取来鉴定。该细胞不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母菌和真菌。

人肠微血管内皮细胞分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至肛门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经肛门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。微血管是极细微的血管，管径平均为6-9μm，连于动、静脉之间，互相连接成网状。微血管壁薄，管径较小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换。其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织。

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入37℃，5%CO2培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2、终末分化的细胞，建议直接使用，不建议扩大培养。

3、待细胞状态稳定时准备转孔培养，进行实验：

二、应用

用于微血管内皮细胞对嗜中性粒细胞杀菌功能的影响研究：

在研究嗜中性粒细胞的灭菌功能是否需要微血管内皮细胞的激活,从而为筛选有效抗菌中兽药奠定理论基础。

方法：利用Transwell通透性支持物,建立了跨越大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的中性粒细胞迁移模型。并且通过菌落计数方法检测了血液中性粒细胞和跨内皮迁移的中性粒细胞胞内胞外杀灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜酸乳杆菌的情况。利用酶标仪检测中性粒细胞MMP-9的浓度和荧光测定的方法检测了溶菌酶的活性。

结果：

1、血液中性粒细胞只能吞噬细菌但并不消灭细菌。

2、LPS和HLa损伤的RIMVECs后,使跨内皮迁移的中性粒细胞丧失了胞内胞外杀菌的能力。

3、而IL-1α诱导的RIMVECs使跨内皮迁移的中性粒细胞具有胞内胞外杀灭革兰氏阳性菌。

4、LTB4和fMLP+CytB趋化的嗜中性粒细胞胞内外杀菌效果明显。

5、IL-1c使得跨内皮迁移的中性粒细胞MMP-9浓度和溶菌酶活性极显著升高（P<